Pha trà: Trà lá đun tầm 20 phút, sau khi sôi để liu riu lửa nhỏ. Nếu dùng trà túi lọc thì có thể nấu nước sôi trước rồi ngâm trà sau. Sau đó lấy túi trà ra hoặc lọc bã trà. Bỏ đường vào khuấy cho tan hết.

Để nguội hỗn hợp đến nhiệt độ 20-30 độ C rồi thêm chất lỏng khởi động vào. Nếu không có chất lỏng khởi động từ mẻ trước có thể đổ giấm vào để thay thế, nếu không có thì sẽ lên men chậm hơn.

Thêm vào Scoby đã được kích hoạt. 20-30 độ C là nhiệt độ lý tưởng cho việc lên men. Nhiệt độ ấm sẽ làm tăng tốc độ lên men, ngược lại nhiệt độ mát làm giảm tốc độ lên men. Bạn càng ngâm Kombucha càng lâu thì vị trà càng chua và ít ngọt.

Đậy hũ bằng vải mùng và buộc chặt bằng dây bện.

Để trà nghỉ ở nhiệt độ phòng, nơi khô ráo, tránh ánh nắng trực tiếp. Sau tầm 5 ngày, bạn nên thử vị và quyết định có kéo dài thời gian lên men không. Trà trở nên ít ngọt và có vị chua, Scoby dày lên, bề mặt nổi các hạt nấm màu nâu, mờ hoặc có Scoby nhỏ trên bề mặt dung dịch, trà có màu sáng. Để biết Kombucha đang lên men đúng cách hay không, bạn có thể thử hương vị của Kombucha. Kombucha sẽ có vị chua-ngọt cân bằng và có men ga, càng để lâu càng chua và ga càng nhiều.

Khi trà có độ chua ngọt vừa phải, đổ phần nước trà ra để dùng dần. Scoby dần dần lớn và dày lên, bề mặt chất lỏng càng to thì Scoby càng to ra, có một lớp những sợi hay đốm nấm màu vàng nâu. Bạn cần xem lại màu sắc, nếu có màu lạ như đen, xanh lục… thì cần bỏ đi và làm lại từ đầu. Cần xem lại môi trường, nếu môi trường bị ẩm thấp, mất vệ sinh thì di chuyển bình ra chỗ khác.

Khi Scoby càng ngày càng lớn do nhân lên, bạn có thể tách các lớp riêng biệt ra và tặng cho bạn bè, kèm theo một mẻ trà để Scoby sống cho đến khi họ dùng đến, hoặc dùng làm mồi cho mẻ trà của họ.

Nhớ tách lớp bên dưới cùng (Scoby già nhất) sau mỗi 2-4 tuần. Đôi khi chỉ cần 1 lớp màng mỏng màu nâu được tách ra là đã đủ để nuôi lớn dần thành 1 Scoby sau 2 tuần được nuôi trong trà.

Dùng dụng cụ lọc để tránh các sợi Scoby nhỏ và Scoby lớn đi theo, các sợi này nếu để lâu trong nước trà cũng dần phát triển được thành Scoby lớn. Giữ lại Scoby và một ít nước trà ở đáy bình để làm mồi cho mẻ tiếp theo

Trong quá trình lên men, bạn có thể nếm thử hương vị của Kombucha để kiểm tra xem nó đã sẵn sàng để uống chưa, nếu:
Nó có vị ngọt: kéo dài thêm thời gian lên men
Nó có vị khá chua: rút ngắn thời gian lên men
Nó đạt đến sự cân bằng giữa vị chua và ngọt: nhẹ nhàng nhấc Scoby ra và dừng quá trình lên men, bạn có thể sử dụng ngay hoặc đóng nắp chai.